序言

本實驗是對醫(yī)用產(chǎn)品公司的一次性醫(yī)療用品進行了輻射滅菌劑量設(shè)定和驗證。實驗原理是基于ISO11137-2：2006的方法，即先對輻照前產(chǎn)品的初始污染菌進行測定，然后選擇驗證劑量。再用驗證劑量對產(chǎn)品進行輻照，并測定輻照后存活微生物的樣品件數(shù)，以此來確定所確定的驗證劑量能夠滿足10-6的滅菌保證水平。

試驗前準備工作

一、樣品

1樣品：醫(yī)用產(chǎn)品，三個批號。

2器具及試劑 2.1器材 試管 容量瓶

三角燒瓶 酒精燈 滅菌剪刀、鑷子 滅菌平皿（9cm） 75％乙醇棉

滅菌刻度吸管(1ml、5ml)  

紫外可見分光光度計 立式壓力蒸汽滅菌器 電熱鼓風(fēng)干燥箱 酸度計 恒溫培養(yǎng)箱 電熱恒溫水浴鍋 生化培養(yǎng)箱 電熱恒溫干燥箱

2.2培養(yǎng)基及試劑： a)流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 b)改良馬丁培養(yǎng)基 c)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

2.3稀釋液、沖洗液及其制備方法  a)質(zhì)量濃度為9g/L的無菌氯化鈉溶液

b)0.1％蛋白胨水溶液  取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.2，分裝，滅菌。

c)pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液  取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。     二、實驗前準備 2.1培養(yǎng)基要求：

用于培養(yǎng)需（厭）氣菌和真菌的培養(yǎng)基的制備、培養(yǎng)基靈敏度檢查及其他各項要求應(yīng)符合《中藥典（二部）》附錄中《無菌檢查法》的規(guī)定。

培養(yǎng)基使用按中藥典方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。制備后采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基保存在2～25℃、避光的環(huán)境。

2.2器具滅菌：與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸氣滅菌器內(nèi)121℃30min，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2h。

2.3無菌室要求：無菌室操作臺局部符合潔凈度100單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完畢后，檢查空氣中的菌落數(shù)，方法如下：取直徑約90mm培養(yǎng)皿數(shù)支，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL，在30℃～35℃培養(yǎng)48h證明無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置打開上蓋，暴露30min后蓋好，置30℃～35℃培養(yǎng)48h后取出檢查，3只培養(yǎng)皿上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個。

無菌試驗過程中檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗開始進行時打開平皿蓋，至試驗結(jié)束蓋好照上法培養(yǎng)，符合上述要求。 2.4陽性對照：

選擇金黃色葡萄球菌為對照菌，接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)24～48小時，將上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液。陽性對照試驗的菌液制備方法驗證試驗，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)48～72小時應(yīng)生長良好。 2.5陰性對照：

取相同稀釋液、沖洗液同上法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。方法

客戶提供生產(chǎn)的醫(yī)用產(chǎn)品，每件醫(yī)用產(chǎn)品均是一個獨立的單元產(chǎn)品，其樣品份額為1。具體步驟如下：

1. 隨機抽取連續(xù)三批常規(guī)生產(chǎn)的產(chǎn)品，每批10件，共30件做生物負載檢測。另從其中一批隨機取5件樣品，做回收率實驗。

2. 當(dāng)每個批平均生物負載都不超過三批總平均生物負載的2倍時，根據(jù)三批的總平均負載的檢測結(jié)果，選擇滅菌保證水平為10-2的滅菌劑量作為驗證劑量。

3. 對以上三批抽樣產(chǎn)品連續(xù)生產(chǎn)的110件產(chǎn)品實施驗證劑量，實際吸收劑量應(yīng)在驗證劑量的±3%之內(nèi)。

4. 對用驗證劑量輻照過的100件產(chǎn)品做無菌實驗，其余的10件產(chǎn)品做無菌試驗的驗證實驗。 5. 根據(jù)無菌實驗的結(jié)果，確定驗證劑量是否被接受，即確定的驗證劑量是否能夠滿足10-6的滅菌保證水平。

實施內(nèi)容

一、回收率測定

取5ml洗脫液洗脫5支產(chǎn)品，分別洗脫四次，然后將樣品用營養(yǎng)瓊脂做瓊脂覆蓋，于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48±2h，記錄結(jié)果并得出修正系數(shù)。 二、初始污染菌測定